A method of fixation of brain specimens based on clinical neurosurgery training
Fan Wenke, Zhu Keming, Li Wensheng
Department of Human Anatomy and Histoembryology, Clinical Anatomy Center, Basic Medical College,
Fudan University, Shanghai 200032, China
随着临床医学和医学教育的发展 ，临床应用解剖学应运 而生，并显示出强大的生命力，它主要面向临床研究生和临床 医学继续教育，在扎实掌握解剖结构的基础上，运用所学解剖 知识来分析和解决临床问题，提高和培养医学生的创新精神， 同时也是适应当代“转化医学”研究热潮的一种具体实践[ 1]。 在“国家医疗，健康中国”卫生战略背景下，我校解剖与组织胚 胎学系以临床解剖中心为平台，以附属中山医院 、华山医院为 依托，常年举办各类临床解剖高级学习班 。根据不同需求，对 解剖标本的质量要求各有差异 ，传统的甲醛灌注浸泡尸体标 本固定技术简单可靠，仍在实验室中广泛应用，但标本质地及 形态由于蛋白质凝固 ，脱水而发生明显皱缩[2] 。而采用冷藏 技术保存的标本由于反复冷冻及复温导致标本变形明显 ，且 标本在实验过程中发生缓慢变质[3] 。基于临床神经外科培训 对脑组织固定有较高的要求 ，我们对新鲜脑组织标本保存处 理做了尝试性改进，取得较为满意的效果，现报道如下：
1. 1. 1 标本 选用新鲜头部无外伤尸体标本 16 例 ，标本由上 海红十字会复旦大学遗体捐献接收站提供 。
1. 1.2 器材 点动式压力泵(河南传硕信息技术有限公司)， 手工钢锯 ，手术刀 ，止血钳 ，解剖剪 ，缝合线 ，0.5 cm 一头尖玻 璃管，0.4 cm 橡胶管 。
1. 1.3 试 剂 及 其 溶 液 配 比 按 每 个 标 本 2% 福 尔 马 林 1000 mL，30% 甘油 50 mL 作为固定液 A 液 。在混合固定液 A 液基 础 上 加 入 2% 硝 酸 钾 溶 液 50 mL，麝 香 草 酚 10 g，30% 乙 醇
2500 mL 作为固定液 B 液 。
1.2. 1 实验前准备 用自来水将材料冲洗干净 ，将大体标本 面朝上水平放置在解剖台上 ，于第 5 颈椎( C5 )处用 U 形枕木 垫高 。
1.2.2 取材和灌注 在 C5 上缘水平切取尸体头颈部标本 。横 行切开皮肤 ，切口斜向下前方 ，向两侧水平延伸达脊柱 ，离断颈部肌群，横断椎骨，避开甲状腺下极以避免灌注时自甲状腺 断端流失灌注液 ，注意保持切口平整 ，处理血管时向外牵拉 ， 尽可能保留较长的血管 。表浅软组织离断后 ，再用钢锯锯至 头颈部与躯干完全分离[4] 。 自来水冲洗干净断面 ，将头部标 本倒置，断面朝上，修洁断面，寻找颈总动脉和颈内静脉，将连 接压力泵端的 0.4 cm 橡胶管套进玻璃管一端 ，结扎 。另一端 插入颈总动脉 ，结扎 。先用 0.9% 生理盐水缓慢冲洗动静脉 ， 确保动静脉畅通 。用空气增压法排净血管残留液体 。先以制 备好的 2% 福尔马林 A液用点动式压力泵每个标本连续点动 灌注 1000 mL，后用保鲜袋结扎放置 - 14 ℃冰箱保存 。 15 d 后 取出 ，流水解冻 0.5 d 后重复上述方法灌注固定液 B 液 。灌注 结束 ，将标本置于剩余固定液 B 液中浸泡 2 d 后即可取出使 用 ，并达到理想状态 ，如图 1A 。未用完标本继续于保存液中 保存 ，无须反复冰冻 、解冻 。经过 15 d 解剖操作 ，观察标本形 态，结构，脑实质等无明显改变，使用良好，如图 1B 。
通过改良标本灌注固定方法对新鲜尸头标本进行处理 ， 标本对眼 、呼吸道基本无刺激 ，脑实质基本无自溶 ，脑部动静 脉无明显变硬 ，颜色红润 ，容易区分 ，脑各部形态接近新鲜标 本 ，保持一定的弹性和韧性(表 1 )。 基本满足临床神经外科 学习培训使用，取得学习培训单位的良好评价 。
应选用新鲜 、病历资料显示无外伤及重大脑部疾病的标 本 。新鲜程度决定脑实质的自溶状态 ，而外伤及脑部重大疾 病决定灌注液能否充分准确到达灌注目标部位 ，最终关系灌 注保存和使用效果 。
动静脉内可能有血凝块影响正常灌注 ，为此灌注前需要 用生理盐水进行冲洗 ，确保动静脉畅通 。为确保固定液到达 颅腔各血管，而又不致血管爆裂，采用点动法灌注 。
目前常用防腐固定剂有单一型和混合型 。改良固定保存 液中加入 2% 福尔马林能够起到对标本加强防腐固定作用，与 传统 5%~ 10% 固定保存液相比能够最大程度减小标本组织的 收缩 ，同时减少刺激性有害气体对人体的伤害 。在混合防腐 固定剂中，甘油是一种良好的选用药物 。利用它的防腐性 、吸湿性和对某些无机盐类药物的特殊溶解力 ，所配成的溶液比 较稳定[5] 。硝酸钾常作为发色剂 ，护色剂 ，抗微生物防腐剂使 用 。麝香草酚对细菌 、酵母和霉菌均有较强的抑制作用，是一 种广谱抑菌剂[6]，不仅增强防腐抗霉力和对标本护色作用 ，而 且配方中加入一定比例的酒精 ，麝香草酚可以减少甲醛的强 烈刺激气味 。
以往用于神经外科培训的标本或经过多次冷藏解冻 ，或 单纯经甲醛灌注 。实际应用过程中发现 ，均出现不同程度的 组织脱水 、自溶；传统甲醛灌注 ，影响到对脑实质 、脑部动静 脉 、脑部小结构的观察 、操作，很难达到接近临床的体验 。此法 采用冰冻固定与湿法保存相结合，使上述问题得到一定解决，具 明显优势。
【参考文献】
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樊文科 ， 朱克明 ， 李文生
